利用cDNA抑制差減雜交技術(shù)建立了水稻減數(shù)分裂時期穗部特異表達的SSH文庫，從中篩選121個cDNA片段作為EST(expressed sequence tags)標(biāo)記，用RFLP(restriction fragment length polymorphism)方法分析了溫敏不育系安農(nóng)S-1和正常品種安農(nóng)N之間的多態(tài)性，其中一個EST標(biāo)記HN57可以檢測到親本間的多態(tài)性。共分離分析結(jié)果表明，HN57與安農(nóng)S-1的溫敏不育性完全共分離，進而將安農(nóng)S-1的溫敏不育基因tms5定位于RGP(rice genome research program)遺傳圖的第二染色體的31.2cM處。為了進行精細(xì)定位，在該區(qū)域設(shè)計了80對SSR(simple sequence repeat)引物對，用12對多態(tài)性引物將tms5定位于181kb區(qū)間。