稻瘟病新抗性基因Pi36候選基因雙元載體的構(gòu)建

劉新瓊, 王春臺(tái), 劉學(xué)群, 王玲

湖北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2007, 46(2): 169-173     追溯原文......本站官方QQ群：62473826

稻瘟病菌; 候選抗性基因; 長(zhǎng)片段PCR技術(shù); 雙元載體

中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物技術(shù)國(guó)家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;華南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院

為了驗(yàn)證Pi36候選基因的功能，利用長(zhǎng)片段PCR(long-range PCR，LR-PCR)技術(shù)從Pi36基因的供體品種Q61中擴(kuò)增了3個(gè)候選基因Pi36-1，Pi36-2，Pi36-3，長(zhǎng)度分別為5.9kb，9.6kb和16.5kb，電泳回收目的片段，將Pi36-1和Pi36-2分別克隆到雙元載體pCAMBIA1300，而將Pi36-3克隆到雙元載體pYLTAC27的AscI位點(diǎn)。為了將Pi36-3也克隆到具有高效轉(zhuǎn)化效率的雙元載體pCAMBIA1300中，首先在不改變pCAMBIA1300基本骨架的前提下，在其多克隆位點(diǎn)增加了AscI酶切位點(diǎn)，獲得新載體pCAMBIA1300AscI；然后將克隆在載體pYLTAC27上的Pi36-3片段切下來(lái)，組裝到新載體pCAMBI-A1300AscI上。經(jīng)過(guò)酶切鑒定和測(cè)序分析，已成功地獲得了3個(gè)候選基因的重組陽(yáng)性克隆，為進(jìn)一步地研究Pi36基因的功能奠定了基礎(chǔ)。

Binary Vector Construction of Candidate Genes of the Blast Resistance Gene Pi36

LIU Xin-qiong, WANG Chun-tai, LIU Xue-qun, WANG Ling

Hubei Agricultural Sciences, 2007, 46(2): 169-173

Magnaporthe grisea; candidate resistance gene; long-range PCR; binary vector

To identify three candidate genes predicted,long-range PCR(LR-PCR) was employed to amplify each of the candidate genes based on the genomic DNA of the donor cv.Q61.The appropriate products of the Pi36-1 and Pi36-2 were purified and then ligated into the binary vector of pCAMBIA1300,as well as that of the Pi36-3 ligated into the binary vector of pLYTAC27 and the reconstructed pCAMBIA1300AscI,respectively.The results would aid to dissect the function of the resistance gene Pi36.

►基因列表◄
  稻瘟病抗性基因 Pi36